Cervicovaginal Gardnerella sialidasa - Grupo de banco de carga Co., Ltd

Scientific Reports volumen 13, número de artículo: 14266 (2023) Citar este artículo

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La alteración de la microbiota vaginal desempeña un papel en la persistencia del virus del papiloma humano (VPHar) de alto riesgo oncogénico y de Gardnerella spp. está estrechamente relacionado con esta condición. Estas bacterias son la principal fuente de sialidasas cervicovaginales, importantes para las alteraciones de la microbiota. El gen nanH3 que codifica la sialidasa es responsable de su actividad sialidasa. Por lo tanto, un subconjunto de 212 mujeres positivas para VPHar en la primera visita se incluyó en el análisis del presente estudio con el objetivo de comparar las cargas de nanH3 en el líquido cervicovaginal (CFV) de mujeres con infección persistente por VPHar y con aquellas que eliminaron la infección después de una año. Los participantes fueron asignados a dos grupos de estudio denominados "persistencia" (n = 124, 53,22%) o "aclaración" (n = 88, 37,77%), según el estado del VPH al momento de la inscripción y el seguimiento. La cuantificación absoluta del gen nanH3 se realizó mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR). El grupo de persistencia y eliminación no mostró diferencias estadísticas en la carga del gen nanH3 (p = 0,19). Al considerar el subconjunto de mujeres con VPH16, se observaron diferencias en el número de copias del gen nanh3 entre el grupo persistente (7,39E+08 copias/μL) y el grupo de eliminación (2,85E+07 copias/μL) (p = 0,007). Por lo tanto, las cargas iniciales del gen nanH3 aumentan en mujeres que persisten con la infección cervical por VPH16 después de 12 meses.

La infección cervical por el virus del papiloma humano (VPH) es la infección de transmisión sexual (ITS) más frecuente a nivel mundial1,2 y la persistencia de las infecciones cervicales por el VPH de alto riesgo (VPHar) durante largos periodos de tiempo causan prácticamente todas las lesiones precursoras y cánceres de cuello uterino3 . A pesar de eso, la mayoría de los casos de infección cervical por VPH desaparecen en 2 años4,5, siendo las respuestas inmunes importantes para su eliminación6.

Los factores asociados con el desarrollo de lesiones cervicales y cáncer incluyen el tabaquismo7, el uso de anticonceptivos hormonales8,9 y la paridad10. Además, el microambiente cervical local, incluida la microbiota vaginal, también puede influir en la historia natural de la infección por VPH11. Por lo tanto, una microbiota vaginal privada de Lactobacillus, como en la vaginosis bacteriana (VB), se ha asociado con una infección persistente por VPH y progresión de la lesión12,13,14.

La vaginosis bacteriana es una disbiosis polimicrobiana, que se produce por la sustitución de Lactobacillus beneficiosos y un aumento de bacterias anaeróbicas y anaeróbicas facultativas, de las cuales, Gardnerella spp. que está presente en casi todos los casos15,16. La producción de sialidasa es uno de los factores de virulencia más importantes de Gardnerella spp.17,18. Entre los efectos deletéreos de las sialidasas bacterianas se encuentra la degradación de varios factores protectores de la mucosa vaginal y la contribución a la exfoliación y desprendimiento de las células epiteliales vaginales19 facilitando la adhesión bacteriana al epitelio y la formación de biopelículas20,21,22, condición ya asociada a persistencia de BV23.

Al principio, el supuesto gen de la sialidasa, nanH1 (gen de la sialidasa A), se identificó en Gardnerella spp. y se pensaba que era el gen responsable de la producción de sialidasa24. Sin embargo, los estudios recientes concluyeron que nanH2 y nanH3 explican la actividad sialidasa observada en cultivos de G. vaginalis25. Además de eso, nanH2 es menos prevalente en los aislados de Gardnerella y siempre se detecta en presencia de nanH318,25.

Hasta hace muy poco, Gardnerella era un único género de especie, pero ahora se han descrito otras tres especies además de G. vaginalis (G. leopoldii, G. piotii y G. swidsinskii)26. Curiosamente, los genes de sialidasa nanH2 y nanH3 solo se detectaron en G. piotii y en un subconjunto de aislados de G. vaginalis18.

Considerando la importancia de comprender mejor la relación entre los componentes bacterianos de la microbiota vaginal y el resultado de la infección por VPHar, el objetivo de este estudio fue comparar las cargas del gen nanH3 que codifica la sialidasa de Gardnerella spp. en el líquido cervicovaginal de mujeres entre la infección persistente por VPHar y aquellas que eliminaron la infección después de un período de 12 meses.

La Tabla 1 muestra las características sociodemográficas, conductuales y clínicas de los participantes, según los grupos de estudio. Los grupos mostraron diferencias en pocas variables como la edad (p = 0,04) y el número de sexo (p < 0,0001). Al considerar el número de genotipos de VPHar detectados, el grupo persistente tuvo más infección mixta que el grupo de eliminación (p = 0,002). En relación con los genotipos de VPH, el VPH52 difirió entre los grupos al considerar infección única o mixta (p = 0,01).

El genotipo detectado con mayor frecuencia en la población (que se muestra en la Tabla complementaria S1) fue el VPH16, seguido del VPH31, el VPH52, el VPH51, el VPH58 y el VPH45, respectivamente. De 233 mujeres incluidas en este estudio, 21 eliminaron el genotipo del VPH detectado al inicio del estudio y se detectó un nuevo genotipo en el seguimiento, por lo que estas mujeres no se incluyeron en el análisis. Por lo tanto, el grupo de eliminación incluyó mujeres sin detección de VPH en el seguimiento (n = 88) y el grupo de persistencia incluye aquellas mujeres que muestran al menos un genotipo detectado al inicio y en el seguimiento (n = 124). Así, las tasas de eliminación y persistencia fueron del 41,50% (n = 88) y del 58,49% (n = 124), respectivamente. Para HPV16, la tasa de eliminación fue del 26,56 % (n = 17) y la persistencia fue del 73,44 % (n = 47).

En cuanto a la presencia del gen nanH3 y el resultado de la infección cervical por VPHar mostrado en la Tabla 2, los grupos no mostraron diferencias en relación con la positividad del gen. Cuando se comparó la cuantificación absoluta del gen nanH3, mostrada por la mediana (mínimo-máximo), en presencia de todos los VPHar, no se observó diferencia en la carga entre el aclaramiento (1,45E+08 copias/μL; 2,30E+04-6,15 E+13) y persistencia (9,16E+08 copias/μL; 3,02E+05–1,72E+13) (p = 0,19). Para los cinco genotipos más prevalentes (VPH16, 31, 52, 51 y 58), el grupo de eliminación mostró 1,02E+08 copias/μL (2,30E+04–6,15E+13) y persistencia 1,82E+09 copias/μL (3,67E+ 05–1,72E+13) (p = 0,02). Al excluir el VPH16, los 5 genotipos más prevalentes (VPH31, 52, 51, 58 y 45) no hubo diferencia, el grupo de aclaramiento mostró 3,60E+08 copias/μL (2,30E+04–6,15E+13) y persistencia 1,36 E+09 (3,67E+05–1,72E+13) (p = 0,42). Las cargas del gen nanH3 difirieron entre el grupo de aclaramiento (2,85E+07 ng/μL; 1,90E+05–4,23E+07) y el grupo de persistencia (7,39E+08 copias/μL; 4,15E+06–4,09E+10) en la presencia de VPH16 (p = 0,007) (Tabla 3).

También se realizaron análisis para probar la asociación entre la microbiota vaginal y el gen nanH3. De las 233 mujeres, 127 (54,51%) tenían microbiota normal, 21 (9,01%) intermedia y 80 (34,33%) tenían VB, detectada mediante la puntuación de Nugent. Los datos de la evaluación de Nugent no estuvieron disponibles para cinco participantes. Entre las mujeres positivas para BV, 52/80 (65%) fueron positivas para nanH3, mientras que 28/80 (35%) fueron negativas para nanH3. Por lo tanto, la sensibilidad y especificidad de la prueba fue del 65% (intervalo de confianza del 95%, 54-75%) y del 75% (66-82%), respectivamente. La Figura 1A muestra un gráfico de barras que ilustra la relación del estado del gen nanH3 en la puntuación normal y BV Nugent, mostrando una diferencia significativa entre las categorías (p <0,0001). En relación con las cargas del gen nanH3 expresadas por la mediana (mínimo-máximo) en el líquido cervicovaginal que se muestra en la Fig. 1B, hubo diferencia entre la microbiota normal (2,06E+08 copias/μL; 2,30E+04–1,37E+13 ) y BV (2,91E+09 copias/μL; 8,17E+03–6,15E+13) (p = 0,0041). Debido a la baja representatividad, en este análisis no se consideró la microbiota intermedia.

Características de asociación entre el gen nanH3 y la microbiota vaginal. (A) Un gráfico de barras que ilustra la relación del estado del gen nanH3 en las dos categorías de puntuación de Nugent (p <0,0001); (B) cargas del gen nanh3 comparadas entre la microbiota normal y la VB (p = 0,0041).

Recientemente, nuestro grupo de estudio demostró que las mujeres con infección persistente por VPH16 y VPH18 tienen mayores cargas iniciales de G. vaginalis27. Por lo tanto, se planteó la hipótesis de que el gen que codifica la sialidasa, que se encuentra frecuentemente en Gardnerella spp.18, podría tener un papel en el resultado de la infección por VPH, siendo un marcador útil de la persistencia del VPHar. Sorprendentemente, las cargas del gen nanH3 diferían entre el grupo de eliminación y de persistencia en presencia de los cinco genotipos más prevalentes; sin embargo, dicha diferencia persiste solo en presencia de HPV16.

Este estudio mostró altas tasas de persistencia del VPH, 58,49% para todas las infecciones por VPHar y 73,44% cuando se considera solo el VPH16. Tales tasas fueron similares a las mostradas en otro estudio realizado en Brasil, con 61,8% de tasa de persistencia28. Las tasas de persistencia en un gran estudio de cohorte retrospectivo realizado en China fueron del 42,7 % en 24 meses29, mientras que un estudio multicéntrico mostró una tasa de persistencia del 54,1 % durante un año en mujeres estadounidenses, canadienses y brasileñas30. En relación con el VPH16, la tasa de persistencia fue del 52,1% después de 12 meses en la cohorte holandesa de mujeres jóvenes31.

En relación con las características sociodemográficas y conductuales de la población de estudio, pocas variables difirieron entre los grupos. La mediana de edad fue mayor en el grupo de aclaramiento, lo que coincide con un estudio que mostró que la mayor persistencia del VPH-AR ocurrió en el grupo de 22 a 27 años, mientras que el aclaramiento aumentó en mujeres de 28 a 33 años32. Sin embargo, otro estudio brasileño no mostró diferencias de edad al evaluar factores asociados al aclaramiento y persistencia después de 24 meses28. El número de parejas sexuales y el número de genotipos detectados difirieron entre el grupo de eliminación y el de persistencia. Además, uno de los cinco genotipos de VPH más prevalentes difería entre los grupos al considerar su detección en infección única o mixta. De hecho, un estudio anterior demostró que los genotipos del VPH difieren en términos del período de eliminación, ya que las mujeres con infecciones mixtas tuvieron más tiempo para eliminar sus infecciones en comparación con aquellas con una sola infección30. El aumento del número de parejas sexuales podría contribuir a la persistencia, ya que aumenta el riesgo de adquirir nuevos genotipos de VPH.

Los estudios sobre la microbiota vaginal han demostrado la asociación entre Gardnerella spp. e infección persistente por VPHar, así como progresión de la lesión cervical33,34. De los resultados de asociación entre Gardnerella spp. con persistencia y progresión del VPHar, Usik et al. propuso que además del papel de Gardnerella spp. En la persistencia viral, también contribuye a la alteración de la microbiota vaginal (es decir, aumento de la diversidad bacteriana), lo que también conduce a la persistencia y progresión de la infección por VPH34.

Como se demostró recientemente, no todas las especies de Gardnerella recientemente descritas producen sialidasa18. Por lo tanto, estudiar la presencia del gen que codifica la sialidasa de Gardnerella es importante para allanar el camino para futuros estudios centrados en el papel de cada individuo de Gardnerella sp. para la infección y persistencia del VPH.

Hasta donde sabemos, este es el primer estudio que evalúa la relación entre la persistencia de la infección por VPHar y cargas del gen nanH3. Se sabe que las sialidasas hidrolizan el ácido siálico de las células epiteliales del huésped, proporcionan una fuente de carbono a Gardnerella permitiendo su absorción y catabolismo y exponen los sitios de unión, facilitando la adhesión bacteriana al epitelio y la formación de biopelículas adicionales20,21,22,35. Las sialidasas aún pueden escindir los oligosacáridos de mucina, lo que disminuye la viscosidad del moco cervicovaginal, comprometiendo la barrera física y bioquímica contra los patógenos36. Además, las sialidasas comprometen la barrera inmune al hidrolizar la inmunoglobulina A35,37. En el presente estudio, los resultados sobre la cuantificación de nanH3 no difirieron cuando se incluyeron todas las infecciones por VPHar agrupadas; sin embargo, las cargas de nanH3 fueron mayores en el líquido cervicovaginal de mujeres con VPH16 persistente.

Los estudios han informado sobre la asociación de la microbiota vaginal alterada con la infección por VPH12,13,14,33,34,38, a pesar de que aún se desconocen los mecanismos por los que puede influir en la infección por VPH. Se sabe que Lactobacillus spp. producen varios factores microbicidas, incluido el ácido láctico39, un agente importante para acidificar el ambiente vaginal y controlar el crecimiento excesivo de bacterias y prevenir las ITS40,41. La diferencia de cargas de nanh3 encontrada en la infección por VPH16 es intrigante; se necesitan nuevos enfoques que involucren la microbiota vaginal y el VPH16, ya que este genotipo es responsable de la mayoría de los casos de lesiones intraepiteliales de alto grado y carcinomas cervicales invasivos42.

Los virus del papiloma humano modulan la respuesta inmunitaria del huésped bloqueando la expresión de genes relacionados con el sistema inmunitario y las vías de señalización inmunitaria, y diferentes genotipos pueden actuar por diferentes vías43. Además, el microbioma cervical y el perfil de citocinas mostraron diferencias notables en todas las etapas de la historia natural del cáncer de cuello uterino44. Por lo tanto, las especies bacterianas pueden interactuar con la señalización inmune durante la infección por VPH contribuyendo a la persistencia y progresión44. Por otro lado, una consecuencia de la evasión inmune del VPH es el desequilibrio en la microbiota vaginal debido a la reducción de la fuente de aminoácidos que sustenta la supervivencia de las especies de Lactobacillus45. Por tanto, la asociación entre VB y VPH parece ser bidireccional. De hecho, un estudio demostró que la estabilidad del microbioma vaginal es necesaria para el mantenimiento de la vigilancia inmunológica para la eliminación del VPH1646. En este sentido, las diferencias en la carga del gen nanH3 en presencia de HPV16 llevan a plantear la hipótesis de que el microambiente vaginal tendría una modulación diferente en presencia de diferentes genotipos y los cambios en la respuesta inmune podrían crear un microambiente más permisivo para las bacterias. crecimiento excesivo.

Gardnerella spp. está presente en prácticamente todos los casos de VB, la disbiosis más frecuente de la microbiota vaginal47. En este estudio, se observó una asociación entre el gen nanH3 y BV. Robinson y cols. sugirieron el uso potencial de nanH3 como marcador de diagnóstico molecular de VB, mostrando dicha prueba de PCR una sensibilidad del 80,95% y una especificidad del 78,26% en comparación con la puntuación de Nugent para el diagnóstico de VB25. Aunque la asociación, en este estudio los valores de sensibilidad y especificidad fueron inferiores a los del estudio mencionado. Vale la pena mencionar que los estudios difieren en términos de prevalencia de VB y número de participantes en el estudio.

Además de la asociación entre el gen nanH3 y BV, la carga del gen aumentó significativamente en BV en comparación con la microbiota normal. Como se discutió anteriormente, las sialidasas tienen efectos nocivos en el microambiente vaginal20,21,22,35,36,37. Recientemente, nuestro grupo de estudio demostró que la actividad de la sialidasa en el BV molecular, evaluada mediante la secuenciación del ARNr 16S V3-V4, se asocia con cambios en los componentes bacterianos del microbioma local, así como con un aumento de los niveles de sialidasa48. De hecho, la actividad sialidasa en el líquido cervicovaginal ya se demostró en presencia de VB detectada por microscopía49,50. De hecho, la actividad sialidasa podría promover el crecimiento o colonización de Prevotella, Bacteroides así como G. vaginalis, bacterias vaginales productoras de sialidasa51,52, siendo la producción de sialidasa un paso importante en la formación de biopelículas24. Tal mecanismo refuerza el papel de Gardnerella spp. como soporte en la mucosa vaginal para la adhesión de otras especies bacterianas, que pueden comenzar a formar biopelículas53, una condición ya asociada con el tratamiento refractario de la VB y la persistencia de bacterias asociadas a la VB después del tratamiento23,54.

Aunque la cantidad de gen nanH3 que codifica la sialidasa no difirió entre la eliminación y la persistencia en presencia de todas las infecciones por VPHar, las cargas son altas en el grupo persistente y hay una diferencia entre los grupos cuando se considera solo la infección por VPH16. Una limitación de este análisis se debe al bajo tamaño de la muestra al estratificar cada genotipo. Además, estos resultados contribuyen a comprender mejor el papel del gen que codifica la sialidasa de G. vaginalis en la VB, ya que esta condición parece tener un papel importante en la persistencia y progresión de la infección por VPH. Por lo tanto, los productos microbianos son herramientas prometedoras para identificar a las mujeres con mayor riesgo de persistencia del VPH.

Entre 2012 y 2014, 1.635 mujeres VIH negativas en edad reproductiva se sometieron a pruebas de detección de infección por VPH en Botucatu, SP, Brasil. Se obtuvieron antecedentes sociodemográficos, conductuales, ginecológicos y datos clínicos durante una entrevista cara a cara mediante un cuestionario estructurado y se ingresaron en una hoja de cálculo de Microsoft Excel (Microsoft Corporation, Redmond, WA, EE. UU.). Luego se invitó a las mujeres VPH positivas a un seguimiento dentro de los 12 meses. Todos los participantes fueron informados sobre los procedimientos del estudio y se obtuvo el consentimiento informado de todos los sujetos ya que todos alcanzaron la mayoría de edad (18 años). Todos los métodos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices y regulaciones pertinentes y este estudio actual fue revisado y aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de Medicina de Botucatu (Número de aprobación: 5.660.472) y las muestras incluidas en el presente estudio pertenecen al biorrepositorio del director. estudio (Número aprobado de Biorrepositorio: 3.140.843).

Las enfermeras y los médicos realizaron los mismos procedimientos de muestreo durante el examen físico en el momento de la inscripción y en la visita de seguimiento. Después de la inserción del espéculo, se obtuvo el contenido vaginal con hisopos para untarlos en portaobjetos de vidrio microscópicos para la puntuación de Nugent, después de la tinción de Gram15. La pared vaginal media se utilizó para el cultivo de Trichomonas vaginalis en medio de Diamond55. Las muestras obtenidas con cepillos endocervicales se almacenaron a -20 ºC hasta la detección de Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae, como se describió anteriormente55,56 y para la detección y genotipado del VPH utilizando el kit Linear Array HPV Genotyping (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA, EE. UU.). Para la toma de muestras de líquido cervicovaginal, se insertaron 3 ml de NaCl al 0,9 % estéril en la pared vaginal, se homogeneizaron con la secreción cervicovaginal y se recuperaron utilizando una pipeta de plástico estéril. Las muestras cervicovaginales se almacenaron a -20 ºC hasta la extracción del ADN genómico y la cuantificación absoluta del gen nanH3 de G. vaginalis.

La extracción de ADN genómico del líquido cervicovaginal se realizó utilizando el kit de aislamiento de ADN UltraClean Soil (MoBio Laboratories, Carlsbad, CA, EE. UU.) según lo recomendado por el fabricante. El ADN extraído se cuantificó utilizando un espectrofotómetro Epoch (Biotek, Winooski, VT, EE. UU.) y la calidad de la extracción se confirmó mediante la relación de absorbancia de 260/280 nm.

Se realizó un paso de clonación para obtener el ADN plasmídico con el gen Gardnerella nanH3, mediante productos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de muestras clínicas utilizando los cebadores Gardnerella nanH3 F (5′-CAGTTCCAATGGAAGTGTGC-3′) y Gardnerella nanH3 R (5′-AGCATCTGGGAATGCTCTTG -3′) con 51 ºC de temperatura de recocido. El tamaño esperado del amplicón fue de 322 pb para el gen nanH3, confirmado en banda de gel de agarosa al 1,5%25. El amplicón de las muestras positivas se purificó utilizando el kit de purificación de banda de gel y ADN de PCR Illustra GFX (GE Healthcare UK Buckinghamshire, Reino Unido) y se secuenció mediante el método Sanger en ABI 3500 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE. UU.) y se confirmó mediante explosión (https: //blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi#alnHdr_2235500528). Los productos amplificados se utilizaron para el paso de ligación utilizando el kit de clonación CloneJET PCR (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, EE. UU.), clonado en Escherichia coli DH5-α (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE. UU.). El ADN plasmídico se extrajo utilizando el kit GeneJET Plasmid Miniprep (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, EE. UU.).

La cuantificación absoluta del gen nanH3 se realizó mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) utilizando 2 × qPCRBIO SyGreen Blue Mix Hi-ROX (PCR Biosystems, Londres, Reino Unido), cebadores Gardnerella nanH3 F y Gardnerella nanH3 R en las siguientes condiciones de ciclado: 95 °C por 2 min, 25 ciclos de desnaturalización a 95 °C por 5 s, recocido a 60 °C por 25 s y una extensión a 95 °C por 15 s seguido de una etapa de disociación: 95 °C por 15 s ; 60 °C durante 1 min y 95 °C durante 15 min, según las recomendaciones del fabricante, realizado en un sistema en tiempo real StepOnePlus (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EE. UU.). Las muestras con un valor de temperatura de fusión de 81 °C +/- 0,5 °C se consideraron positivas para el gen nanH3. Para construir la curva estándar, se utilizaron tres diluciones de plásmido (3,05E+05 copias/μL, 3,05E+07 copias/μL y 3,05E+09 copias/μL) para la interpolación del umbral del ciclo de muestra. Las cargas del gen nanH3 se expresaron como el número de copias por volumen (μL) de líquido cervicovaginal.

En la primera visita, 544 (33,27%) mujeres dieron positivo para alguna infección por VPH, de las cuales 413 (25,26%) dieron positivo para genotipos de VPHar y fueron reclutadas para la visita de seguimiento después de 12 meses. Cuatrocientas sesenta y dos (27,65%) mujeres regresaron al seguimiento. Para el presente estudio, no se incluyeron mujeres positivas para Chlamydia trachomatis (138, 8,44%), Trichomonas vaginalis (23, 1,41%), Neisseria gonorrhoeae (2, 0,12%) y solo VPH de bajo riesgo (131, 8,01%). el analisis. Cinco mujeres fueron excluidas de este estudio debido a datos contradictorios en la base de datos de la hoja de cálculo. De eso, 245 (14,96%) mujeres fueron positivas para el VPHar (VPH16, VPH18, VPH31, VPH33, VPH35, VPH39, VPH45, VPH51, VPH52, VPH56, VPH58, VPH59, VPH68, VPH73, VPH82), sin embargo, se excluyeron 12 muestras. debido a un volumen insuficiente de líquido cervicovaginal para el análisis de laboratorio del presente estudio. Por lo tanto, se incluyeron 233 muestras de líquido cervicovaginal para el análisis de este estudio. Los participantes fueron asignados a dos grupos según el estado de la infección por VPHar en el momento de la inscripción y durante el seguimiento: el "grupo de autorización" comprendía a los participantes que dieron negativo para cualquier VPHar en el seguimiento y en el "grupo de persistencia" se asignaron los participantes positivos para el genotipo del VPHar. en primera visita y seguimiento, emparejados con los detectados en el seguimiento. Para el grupo de eliminación, no se incluyeron 21 mujeres que mostraron eliminación del genotipo inicial y a las que se les detectó un nuevo genotipo en el seguimiento.

Para las comparaciones de variables sociodemográficas, conductuales y clínicas entre los grupos de eliminación y persistencia, se utilizaron chi-cuadrado o exacto de Fisher para variables categóricas y pruebas de Mann-Whitney para variables continuas. Las cargas y la presencia del gen nanH3 se compararon entre los grupos de estudio utilizando, respectivamente, las pruebas de Mann-Whitney y chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher. Todos los análisis consideraron que un valor de P <0,05 era estadísticamente significativo y se realizaron utilizando el software GraphPad Prism (versión 6.0, GraphPad, CA, EE. UU.).

Los conjuntos de datos utilizados y/o analizados durante el presente estudio están disponibles del autor correspondiente previa solicitud razonable.

de Sanjosé, S. et al. Prevalencia mundial y distribución del genotipo del ADN del virus del papiloma humano cervical en mujeres con citología normal: un metanálisis. Infección por lanceta. Dis. 7, 453–459. https://doi.org/10.1016/S1473-3099(07)70158-5 (2007).

Artículo PubMed Google Scholar

Bruni, L. y col. Prevalencia del virus del papiloma humano cervical en los 5 continentes: metanálisis de 1 millón de mujeres con hallazgos citológicos normales. J. Infectar. Dis. 202, 1789–1799. https://doi.org/10.1086/657321 (2010).

Artículo PubMed Google Scholar

Schiffman, M., Castle, PE, Jerome, J., Rodríguez, AC & Wacholder, S. Virus del papiloma humano y cáncer de cuello uterino. Lanceta 370, 890–907. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(07)61416-0 (2007).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Jaisamrarn, U. et al. Historia natural de la progresión de la infección por VPH hasta la lesión o eliminación del cuello uterino: análisis del grupo de control del gran estudio aleatorizado PATRICIA. MÁS UNO 8, e79260. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079260 (2013).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Winer, RL y cols. Historia natural temprana de infecciones incidentes por virus del papiloma humano de tipo específico en mujeres jóvenes recientemente activas sexualmente. Epidemiol del cáncer. Biomarca. Anterior. 20, 699–707. https://doi.org/10.1158/1055-9965.EPI-10-1108 (2011).

Artículo de Google Scholar

Stanley, MA y Sterling, JC Respuestas del huésped a la infección por el virus del papiloma humano. actual. Problema. Dermatol. 45, 58–74. https://doi.org/10.1159/000355964 (2014).

Artículo PubMed Google Scholar

Eldridge, RC y cols. Tabaquismo y posterior infección por el virus del papiloma humano: un análisis de mediación. Ana. Epidemiol. 27, 724-730.e721. https://doi.org/10.1016/j.annepidem.2017.10.004 (2017).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Smith, JS y cols. Cáncer de cuello uterino y uso de anticonceptivos hormonales: una revisión sistemática. Lanceta 361, 1159-1167. https://doi.org/10.1016/s0140-6736(03)12949-2 (2003).

Artículo PubMed Google Scholar

Moreno, V. et al. Efecto de los anticonceptivos orales sobre el riesgo de cáncer de cuello uterino en mujeres con infección por el virus del papiloma humano: el estudio multicéntrico de casos y controles de la IARC. Lanceta 359, 1085-1092. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(02)08150-3 (2002).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Muñoz, N. et al. Papel de la paridad y el virus del papiloma humano en el cáncer de cuello uterino: el estudio multicéntrico de casos y controles de la IARC. Lanceta 30, 1093-1101. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(02)08151-5 (2002).

Artículo de Google Scholar

Castle, PE y Giuliano, AR Capítulo 4: Infecciones del tracto genital, inflamación cervical y nutrientes antioxidantes: evaluación de su papel como cofactores del virus del papiloma humano. J. Natl. Instituto de Cáncer. Monogr. https://doi.org/10.1093/oxfordjournals.jncimonographs.a003478 (2003).

Gillet, E. et al. La vaginosis bacteriana se asocia con la infección por el virus del papiloma humano del cuello uterino: un metanálisis. Infección BMC. Dis. 11, 10. https://doi.org/10.1186/1471-2334-11-10 (2011).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Guo, YL, You, K., Qiao, J., Zhao, YM & Geng, L. La vaginosis bacteriana favorece la persistencia de la infección por VPH. En t. J. ETS SIDA 23, 581–584. https://doi.org/10.1258/ijsa.2012.011342 (2012).

Artículo PubMed Google Scholar

King, CC y cols. Vaginosis bacteriana y la historia natural del virus del papiloma humano. Infectar. Dis. Obstet. Ginecol. 2011, 319460. https://doi.org/10.1155/2011/319460 (2011).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Nugent, RP, Krohn, MA y Hillier, SL La fiabilidad del diagnóstico de la vaginosis bacteriana mejora mediante un método estandarizado de interpretación de la tinción de Gram. J.Clin. Microbiol. 29, 297–301. https://doi.org/10.1128/jcm.29.2.297-301.1991 (1991).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Marconi, C., Donders, GG, Parada, CM, Giraldo, PC y da Silva, MG Do Atopobium vaginae, Megasphaera sp. y Leptotrichia sp. ¿Cambiar la respuesta inmune innata local y la actividad de la sialidasa en la vaginosis bacteriana? Transmisión sexual. Infectar. 89, 167-173. https://doi.org/10.1136/sextrans-2012-050616 (2013).

Artículo PubMed Google Scholar

Schellenberg, JJ y cols. Subgrupos de Gardnerella vaginalis definidos por secuenciación de cpn60 y actividad de sialidasa en aislamientos de Canadá, Bélgica y Kenia. MÁS UNO 11, e0146510. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0146510 (2016).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kurukulasuriya, SP, Patterson, MH y Hill, JE Error de emparejamiento de hebras deslizadas en el gen que codifica la sialidasa NanH3 en. Infect. Inmune. https://doi.org/10.1128/IAI.00583-20 (2021).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Cauci, S. y col. Determinación de la inmunoglobulina A contra las actividades de hemolisina, sialidasa y prolidasa de Gardnerella vaginalis en el fluido vaginal: implicaciones para los resultados adversos del embarazo. J.Clin. Microbiol. 41, 435–438. https://doi.org/10.1128/JCM.41.1.435-438.2003 (2003).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Swidsinski, A. et al. Biopelículas adherentes en vaginosis bacteriana. Obstet. Ginecol. 106, 1013–1023. https://doi.org/10.1097/01.AOG.0000183594.45524.d2 (2005).

Artículo PubMed Google Scholar

Varki, A. Múltiples cambios en la biología del ácido siálico durante la evolución humana. Glicoconj. J. 26, 231–245. https://doi.org/10.1007/s10719-008-9183-z (2009).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Varki, A. & Gagneux, P. Múltiples funciones de los ácidos siálicos en la inmunidad. Ana. Académico de Nueva York. Ciencia. 1253, 16–36. https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.2012.06517.x (2012).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Verstraelen, H. & Swidsinski, A. La biopelícula en la vaginosis bacteriana: implicaciones para la epidemiología, el diagnóstico y el tratamiento: actualización de 2018. actual. Opinión. Infectar. Dis. 32, 38–42. https://doi.org/10.1097/QCO.0000000000000516 (2019).

Artículo PubMed Google Scholar

Santiago, GL et al. Gardnerella vaginalis comprende tres genotipos distintos de los cuales sólo dos producen sialidasa. Soy. J. Obstet. Ginecol. 204(450), e451-457. https://doi.org/10.1016/j.ajog.2010.12.061 (2011).

Artículo de Google Scholar

Robinson, LS, Schwebke, J., Lewis, WG y Lewis, AL Identificación y caracterización de NanH2 y NanH3, enzimas responsables de la actividad sialidasa en la bacteria vaginal. J. Biol. Química. 294, 5230–5245. https://doi.org/10.1074/jbc.RA118.006221 (2019).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Vaneechoutte, M. y col. Descripción modificada de Gardnerella vaginalis y descripción de Gardnerella leopoldii sp. nov., Gardnerella piotii sp. nov. y Gardnerella swidsinskii sp. nov., con la delimitación de 13 especies genómicas dentro del género Gardnerella. En t. J. Sistema. Evolución. Microbiol. 69, 679–687. https://doi.org/10.1099/ijsem.0.003200 (2019).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Belleti, R. y col. Cargas cervicovaginales de Gardnerella spp. aumentan en mujeres inmunocompetentes con infección persistente por el virus del papiloma humano de alto riesgo. J. Med. Microbiol. https://doi.org/10.1099/jmm.0.001527 (2022).

Artículo PubMed Google Scholar

Miranda, PM et al. Persistencia o eliminación de infecciones por virus del papiloma humano en mujeres de Ouro Preto, Brasil. Biomédica. Res. En t. 2013, 578276. https://doi.org/10.1155/2013/578276 (2013).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Li, M. y col. Incidencia, persistencia y eliminación del virus del papiloma humano cervical entre mujeres en Guangdong, China, 2007-2018: un estudio de cohorte retrospectivo. J. Infectar. Salud pública 14, 42–49. https://doi.org/10.1016/j.jiph.2020.11.011 (2021).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Ramanakumar, AV y cols. Incidencia y duración de la infección por el virus del papiloma humano de tipo específico en mujeres de alto riesgo que nunca han recibido VPH: resultados del grupo de control de un ensayo de fase II de la vacuna VPH-16/18. BMJ Abierto 6, e011371. https://doi.org/10.1136/bmjopen-2016-011371 (2016).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

van der Weele, P. et al. Correlación entre la carga viral, la multiplicidad de la infección y la persistencia de la infección por VPH16 y VPH18 en una cohorte holandesa de mujeres jóvenes. J.Clin. Virol. 83, 6-11. https://doi.org/10.1016/j.jcv.2016.07.020 (2016).

Artículo PubMed Google Scholar

Sammarco, ML, Del Riccio, I., Tamburro, M., Grasso, GM y Ripabelli, G. Persistencia de tipo específico y factores de riesgo asociados de infecciones por virus del papiloma humano en mujeres que viven en el centro de Italia. EUR. J. Obstet. Ginecol. Reproducción. Biol. 168, 222–226. https://doi.org/10.1016/j.ejogrb.2013.01.012 (2013).

Artículo PubMed Google Scholar

Di Paola, M. et al. Caracterización de la microbiota cervicovaginal en mujeres que desarrollan una infección persistente por el Virus del Papiloma Humano de alto riesgo. Ciencia. Rep. 7, 10200. https://doi.org/10.1038/s41598-017-09842-6 (2017).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Usyk, M. y col. Microbioma cervicovaginal e historia natural del VPH en un estudio longitudinal. Patógeno PLoS. 16, e1008376. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008376 (2020).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Lewis, WG, Robinson, LS, Gilbert, NM, Perry, JC y Lewis, AL Degradación, búsqueda de alimento y agotamiento de los sialoglicanos mucosos por Actinobacterium Gardnerella vaginalis adaptado a la vagina. J. Biol. Química. 288, 12067–12079. https://doi.org/10.1074/jbc.M113.453654 (2013).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Howe, L. y col. Actividad mucinasa y sialidasa de la microflora vaginal: implicaciones para la patogénesis del trabajo de parto prematuro. En t. J. ETS SIDA 10, 442–447. https://doi.org/10.1258/0956462991914438 (1999).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Lewis, WG y cols. Hidrólisis de la inmunoglobulina A (IgA) de sialoglicoproteína secretada en modelos ex vivo y bioquímicos de vaginosis bacteriana. J. Biol. Química. 287, 2079–2089. https://doi.org/10.1074/jbc.M111.278135 (2012).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Brotman, RM y cols. Interacción entre la dinámica temporal de la microbiota vaginal y la detección del virus del papiloma humano. J. Infectar. Dis. 210, 1723–1733. https://doi.org/10.1093/infdis/jiu330 (2014).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Boskey, ER, Telsch, KM, Whaley, KJ, Moench, TR y Cone, RA La producción de ácido por la flora vaginal in vitro es consistente con la tasa y el grado de acidificación vaginal. Infectar. Inmune. 67, 5170–5175. https://doi.org/10.1128/IAI.67.10.5170-5175.1999 (1999).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

O'Hanlon, DE, Moench, TR y Cone, RA En el fluido vaginal, las bacterias asociadas con la vaginosis bacteriana se pueden suprimir con ácido láctico pero no con peróxido de hidrógeno. Infección BMC. Dis. 11, 200. https://doi.org/10.1186/1471-2334-11-200 (2011).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Alakomi, HL y cols. El ácido láctico permeabiliza las bacterias Gram-negativas al romper la membrana externa. Aplica. Reinar. Microbiol. 66, 2001-2005. https://doi.org/10.1128/AEM.66.5.2001-2005.2000 (2000).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Ciapponi, A., Bardach, A., Glujovsky, D., Gibbons, L. & Picconi, MA Prevalencia del VPH de tipo específico en el cáncer de cuello uterino y lesiones de alto grado en América Latina y el Caribe: revisión sistemática y metanálisis. MÁS UNO 6, e25493. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0025493 (2011).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Zhou, C., Tuong, ZK & Frazer, IH Las estrategias de evasión inmune del virus del papiloma se dirigen a la célula infectada y al sistema inmunológico local. Frente. Oncol. 9, 682. https://doi.org/10.3389/fonc.2019.00682 (2019).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Audirac-Chalifour, A. et al. Microbioma cervical y perfil de citoquinas en diversas etapas del cáncer de cuello uterino: un estudio piloto. MÁS UNO 11, e0153274. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0153274 (2016).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Lebeau, A. y col. La infección por VPH altera el microbioma vaginal mediante la regulación negativa de los péptidos innatos de la mucosa del huésped utilizados por los lactobacilos como fuentes de aminoácidos. Nat. Comunitario. 13, 1076. https://doi.org/10.1038/s41467-022-28724-8 (2022).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Moscicki, AB, Shi, B., Huang, H., Barnard, E. y Li, H. Microbioma cervical-vaginal y perfiles de citocinas asociados en un estudio prospectivo de la adquisición, persistencia y eliminación del VPH 16. Frente. Infección celular. Microbiol. 10, 569022. https://doi.org/10.3389/fcimb.2020.569022 (2020).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Schwebke, JR, Muzny, CA y Josey, WE Papel de Gardnerella vaginalis en la patogénesis de la vaginosis bacteriana: un modelo conceptual. J. Infectar. Dis. 210, 338–343. https://doi.org/10.1093/infdis/jiu089 (2014).

Artículo PubMed Google Scholar

Ferreira, CST, Marconi, C., Parada, CMGL, Ravel, J. & da Silva, MG La actividad de la sialidasa en el líquido cervicovaginal se asocia con cambios en los componentes bacterianos de la microbiota privada de Lactobacillus. Frente. Infección celular. Microbiol. 11, 813520. https://doi.org/10.3389/fcimb.2021.813520 (2021).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Marconi, C. y col. La actividad de la sialidasa en la vaginitis aeróbica es igual a los niveles durante la vaginosis bacteriana. EUR. J. Obstet. Ginecol. Reproducción. Biol. 167, 205–209. https://doi.org/10.1016/j.ejogrb.2012.12.003 (2013).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Santos-Greatti, MMV, da Silva, MG, Ferreira, CST & Marconi, C. Citoquinas cervicovaginales, actividad sialidasa y carga bacteriana en mujeres en edad reproductiva con flora vaginal intermedia. J. Reproducción. Inmunol. 118, 36–41. https://doi.org/10.1016/j.jri.2016.08.005 (2016).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Briselden, AM, Moncla, BJ, Stevens, CE y Hillier, SL Sialidasas (neuraminidasas) en la vaginosis bacteriana y la microflora asociada a la vaginosis bacteriana. J.Clin. Microbiol. 30, 663–666. https://doi.org/10.1128/jcm.30.3.663-666.1992 (1992).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Olmsted, SS, Meyn, LA, Rohan, LC y Hillier, SL Actividad glicosidasa y proteinasa de bacterias anaeróbicas gramnegativas aisladas de mujeres con vaginosis bacteriana. Transmisión sexual. Dis. 30, 257–261. https://doi.org/10.1097/00007435-200303000-00016 (2003).

Artículo PubMed Google Scholar

Muzny, CA & Schwebke, JR Patogénesis de la vaginosis bacteriana: Discusión de las hipótesis actuales. J. Infectar. Dis. 214 (Suplemento 1), T1-5. https://doi.org/10.1093/infdis/jiw121 (2016).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Swidsinski, A. et al. Una biopelícula adherente de Gardnerella vaginalis persiste en el epitelio vaginal después del tratamiento estándar con metronidazol oral. Soy. J. Obstet. Ginecol. 198(97), e91-96. https://doi.org/10.1016/j.ajog.2007.06.039 (2008).

Artículo CAS Google Scholar

Marconi, C., Duarte, MT, Silva, DC & Silva, MG Prevalencia y factores de riesgo de vaginosis bacteriana entre mujeres en edad reproductiva que asisten a exámenes de detección cervical en el sureste de Brasil. En t. J. Gynaecol. Obstet. 131, 137–141. https://doi.org/10.1016/j.ijgo.2015.05.016 (2015).

Artículo PubMed Google Scholar

Goire, N., Nissen, MD, LeCornec, GM, Sloots, TP y Whiley, DM Un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real dúplex de Neisseria gonorrhoeae dirigido al pseudogén gonocócico porA y a los genes opa multicopia. Diagnóstico. Microbiol. Infectar. Dis. 61, 6-12. https://doi.org/10.1016/j.diagmicrobio.2007.12.007 (2008).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Descargar referencias

Agradecemos al Consejo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico (CNPq) y a la Fundación de Investigación de São Paulo (FAPESP) por la beca de doctorado (número: 141113/2019-7) y la beca de investigación (número: 2012/01278-0), respectivamente. . También agradecemos a la Facultad de Medicina de Botucatu y a todas las mujeres incluidas en el estudio, por permitir realizar dicho análisis y el presente estudio.

Departamento de Patología, Facultad de Medicina de Botucatu, UNESP, Universidad Estatal de São Paulo, São Paulo, Brasil

Juliano Novak, Rafael Belleti, Gabriel Vitor da Silva Pinto, Aline do Nascimento Bolpetti, Márcia Guimarães da Silva y Camila Marconi

Departamento de Patología Básica, Sector de Ciencias Biológicas, UFPR, Universidad Federal de Paraná, Curitiba, Brasil

Camila Marconi

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CM y MG concibieron y supervisaron el estudio. ANB y GVSP reclutaron voluntarios. JN, RF, ANB y GVSP realizaron los experimentos. JN realizó el análisis estadístico e interpretó los datos. JN escribió el manuscrito bajo la supervisión de CM. Todos los autores leyeron, revisaron y aprobaron el manuscrito final.

Correspondencia a Juliano Novak.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

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Reimpresiones y permisos

Novak, J., Belleti, R., da Silva Pinto, GV et al. Gen cervicovaginal que codifica la sialidasa de Gardnerella en la infección persistente por el virus del papiloma humano. Informe científico 13, 14266 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-41469-8

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Recibido: 04 de marzo de 2023

Aceptado: 27 de agosto de 2023

Publicado: 31 de agosto de 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-41469-8

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